紫外分光光度計(jì)是將成分復(fù)雜的光，分解為光譜線的科學(xué)儀器，測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～400 nm的紫外光區(qū)，不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜，因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

紫外分光光度計(jì)的原理：

紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長(zhǎng)的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。

紫外分光光度計(jì)的操作步驟：

1.預(yù)熱儀器。為使測(cè)定穩(wěn)定，將電源開關(guān)打開，使儀器預(yù)熱20min，為了防止光電管疲勞，不要連續(xù)光照。預(yù)熱紫外分光光度計(jì)時(shí)和在不測(cè)定時(shí)應(yīng)將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷。

2.選定波長(zhǎng)。根據(jù)要求，轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器，使指針指示所需要的單色光波長(zhǎng)。

3.固定靈敏度檔。根據(jù)有色溶液對(duì)光的吸收情況，為使吸光度讀數(shù)為0.2-0.7，選擇合適的靈敏度。為此，旋動(dòng)紫外分光光度計(jì)的靈敏度檔，使其固定于某一檔，在實(shí)驗(yàn)過程中不再變動(dòng)。一般測(cè)量固定在“1”檔。

4.調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)。輕輕旋動(dòng)調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí)，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照)。

5.調(diào)節(jié)T=100%。將盛蒸餾水(或空白溶液或純?nèi)軇?的比色皿放入比色皿座架中的格內(nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動(dòng)光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100%，即表頭指針恰好指在T=100%處。

6.測(cè)定。輕輕拉動(dòng)紫外分光光度計(jì)比色皿座架拉桿，使有色溶液進(jìn)入光路，此時(shí)表頭指針?biāo)緸樵撚猩芤旱奈舛華。讀數(shù)后，打開比色皿暗箱蓋。

7.關(guān)機(jī)。實(shí)驗(yàn)完畢，切斷紫外分光光度計(jì)的電源，將比色皿取出洗凈，并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。